本文标题qqpcrtp pcr扩增体系包括什么，作者：天意君，请您欣赏。天意生活网众多优秀文章，如果想要浏览更多相关文章，请使用网站导航的搜索进行搜索。本站虽然不乏优秀之作，但仅作为投资者学习参考。
qqpcrtp，pcr扩增体系包括什么？
PCR扩增体系主要由引物，酶，dNTP，模板，Mg2+等基本要素组成。
(一) PCR扩增原理
PCR(Polymerase ChainReaction) ， 即聚合酶链反应， 是由Kary Mullis等人首创的一项体外快速扩增DNA的方法， 它可使极微量的某一特定序列的DNA片段在数小时内特异性扩增至百万倍以上。PCR扩增DNA通常由20~40个PCR循环组成。
每个循环由高温变性、低温退火、适温延伸3个步骤组成。高温时， DNA变性，氢键打开，双链变为单链以作为扩增的模板；低温时，一对引物(即左端引物和右端引物) 分别与模板DNA的2条单链特异性互补结合， 即退火；
然后适温时， 在DNA聚合酶介导下， 将4种三磷酸脱氧核苷(dATP、dTTP、dGTP、dCTP) 按碱基互补配对原则不断添加到引物末端， 按5'→3'方向将引物延伸自动合成新的DNA链， 使DNA重新变成双链。将合成的DNA双链不断重复以上的变性、退火、延伸过程， 则左、右引物间这段DNA的量就可指数倍增加。
若重复进行这一反应n次， 从理论上讲原始的DNA数量可以被扩增为原来的2”倍， 因此DNA的量在短时间内特异性地获得了极度的放大。
pcr反应对模板DNA浓度的最低要求是多少？
模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶： 1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的 2、高效一点的酶，几ng也可以扩增出来的。
1、PCR反应步骤：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成 2、PCR反应五要素：①引物（Primer）、②酶 （Taq DNA Polymerase） 、③dNTP（dATP, dGTP, dCTP, dTTP）、④模板（Template）、⑤Mg2+（Magnesium） 3、引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 4、酶及其浓度：目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。5、模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。6、PCR扩增条件包括温度、时间和循环次数。以上便是老司机给大家分享的qqpcrtp pcr扩增体系包括什么的相关信息了，希望能帮助到大家，更多相关信息，敬请关注天意生活网！